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            人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)elisa试剂盒实验注意事项

            日期:2021-12-06 23:27
            浏览次数:1087
            摘要:人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)elisa试剂盒实验注意事项

            人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA试剂盒实验注意事项

            规格: 48T/ 96T

            仅供参考说明书 价格 规格 请联系客服

            检测原理

            试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联**吸附试验(ELISA)。往预先包被抗体的微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

            样品收集、处理及保存方法

            1.  血清:使用不含热原和内**的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

            2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

            3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

            4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

            5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

            自备物品

            1. 酶标仪(450nm)

            2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

            3. 37℃恒温箱

            操作注意事项          人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)elisa试剂盒实验注意事项

            1.  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

            2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

            3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白,按照说明书操作时样本已经稀释5倍,zui终结果乘以5才是样本实际浓度。

            4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

            5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

            试剂盒组成

            名称

            96孔配置

            48孔配置

            备注

            微孔酶标板

            12孔×8条

            12孔×4条

            标准品

            0.3mL*6管

            0.3mL*6管

            样本稀释液

            6mL

            3mL

            检测抗体-HRP

            10mL

            5mL

            20×洗涤缓冲液

            25mL

            15mL

            按说明书进行稀释

            底物A

            6mL

            3mL

            底物B

            6mL

            3mL


            终止液

            6mL

            3mL

            封板膜

            2张

            2张

            说明书

            1份

            1份

            自封袋

            1个

            1个

            试剂的准备                人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)elisa试剂盒实验注意事项

             20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

            洗板方法

            1.  手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。

            2.  自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

            操作步骤                    人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)elisa试剂盒实验注意事项

            1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

            2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

            3.  待测样本孔先加样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白孔不加。

            4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

            5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

            6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

            7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

            结果判断                      人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)elisa试剂盒实验注意事项

             绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

            试剂盒性能

            1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

            2.  灵敏度:zui低检测浓度小于0.1 mU/L。

            3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

            4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

            5.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

            6.  有效期:6个月

            免责声明

            1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

            2.   严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

             人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)elisa试剂盒实验注意事项

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