细胞培养**污染定性荧光检测试剂盒-产品说明书中文版
技术背景
细胞培养**污染定性荧光检测试剂盒-产品说明书中文版
细胞培养中的主要微生物污染包括支原体(mycoplasma)、**、**、酵母和病毒等。在含有***的培养液中,低水平的**污染则难以观察和发现。SYTO-9染料为一种自由穿透质膜,并特异性结合核酸的荧光染料,一旦结合,呈现强力的绿色荧光。细胞培养**污染定性荧光染色技术,通过SYTO-9对**核酸的染色,替代**培养技术,具有快速检测细胞培养中**的存在,在荧光显微镜下(激发波长485nm,散发波长500nm)下观察到绿色点状(dots)或杆状(rods)。
细胞培养**污染定性荧光检测试剂盒-产品说明书中文版
产品内容
细胞培养**污染定性荧光检测试剂盒-产品说明书中文版
HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO染色液(Reagent B) 微升
HEPENGBIO稀释液(Reagent C) 毫升
产品说明书 1份
细胞培养**污染定性荧光检测试剂盒-产品说明书中文版
保存方式
保存在-20℃冰箱里,避免光照;有效保证6月
用户自备
细胞培养**污染定性荧光检测试剂盒-产品说明书中文版
1.5毫升离心管:用于工作液配制的容器
载玻片和盖玻片:用于样品染色的载体
台式离心机:用于悬浮细胞操作
细胞培养板或培养皿:用于培养细胞的容器
荧光显微镜:用于观察荧光染情况
实验步骤
实验开始前,将-20的试剂置于室温下冻融。然后移取xx微升HEPENGBIO染色液(Reagent B)到1.5毫升离心管,加入xx微升HEPENGBIO稀释液(Reagent C),混匀后,标记为HEPENGBIO染色工作液,放进暗室里备用。
一、 贴壁细胞培养检测
细胞培养**污染定性荧光检测试剂盒-产品说明书中文版
1. 准备好待测细胞培养至50%铺满率
2. 小心移取5毫升细胞培养容器里的培养液到15毫升锥形离心管
3. 放进台式离心机离心15分钟,速度为1000g
4. 小心抽掉上清液
5. 加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A),混匀细胞颗粒群
6. 放进台式离心机离心15分钟,速度为1000g
7. 小心抽掉上清液
8. 加入xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),混匀
9. 移取20微升混匀液到洁净的载玻片上
10. 放进37培养箱孵育10分钟,使其晾干
11. 快速在酒精灯火上加热固定(注意:切忌过热处理)
12. 加上xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A)在载玻片上,覆盖样品
13. 室温下孵育5分钟
14. 小心抽去清理液
15. 加上xx微升HEPENGBIO染色工作液在载玻片上,盖上盖玻片
16. 在室温下,暗室里孵育5分钟
17. (选择步骤)移去盖玻片,小心抽去染色液
18. (选择步骤)小心加上xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A)在载玻片上,覆盖样品
19. (选择步骤)小心抽去清理液
20. 封片处理
21. 置于荧光显微镜下观察染情况(400至1000倍放大倍数):激发波长485nm,散发波长500nm
胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等绿色荧光
二、悬浮细胞培养检测
1. 将待测悬浮细胞(1 X 105总量)移入到15毫升锥形离心管
2. 放进台式离心机离心15分钟,速度为1000g
3. 小心抽去上清液
4. 加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A),混匀细胞颗粒群
5. 放进台式离心机离心5分钟,速度为500g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
6. 小心抽去上清液
7. 加入xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),混匀细胞颗粒群
8. 移取20微升混匀液到洁净的载玻片上
9. 放进37培养箱孵育10分钟,使其晾干
10. 快速在酒精灯火上加热固定(注意:切忌过热处理)
11. 加上50微升HEPENGBIO清理液(Reagent A)在载玻片上,覆盖样品
12. 室温下孵育5分钟
13. 小心抽去清理液
14. 加上xx微升HEPENGBIO染色工作液在载玻片上,盖上盖玻片
15. 在室温下,暗室里孵育5分钟
16. (选择步骤)移去盖玻片,小心抽去染色液
17. (选择步骤)小心加上xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A)在载玻片上,覆盖样品
18. (选择步骤)小心抽去清理液
19. 封片处理
20. 置于荧光显微镜下观察染色况(400至1000倍放大倍数):激发波长485nm,散发波长500nm
胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等绿色荧光
注意事项
1. 本产品为20次操作
2. 操作时须戴手套
3. 操作时,严格无菌操作
4. 染色时,避免光照
5. 细胞染色前后的清洗过程中,小心操作
6. 阳性图像可见绿色发亮的细小点状、杆状等染色;标准**染色见下图:
细胞培养**污染定性荧光检测试剂盒-产品说明书中文版
7. 如果有**和酵母污染,可见较大的胞体染色
8. 如果为细胞碎片,可见不规则染色
9. 本公司提供系列细胞培养污染检测试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定荧光清晰
细胞培养**污染定性荧光检测试剂盒-产品说明书中文版